ACIDES AMINES METHODE D'ETUDE
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00:00:00 Salut les gens, c'est parti alors, pour la vidéo d'aujourd'hui, ce que nous allons faire, nous allons faire les méthodes d'études des assieds aminés.
00:00:10 Donc bon, pour faire ce cours, c'est très simple.
00:00:15 Mais nous allons y arriver.
00:00:17 Pour faire le cours des méthodes d'études des assieds aminés, il faut savoir deux choses essentielles.
00:00:22 Ce sont les méthodes chromatographiques, le principe de la chromatographie et le principe de l'électrophorese.
00:00:30 Ce sont les bases des méthodes témoignons.
00:00:33 On peut classer les méthodes d'études témoignons des assieds aminés avec deux classifications.
00:00:40 Soit on va classifier selon la propriété que nous allons utiliser pour départager ou départager les aminés témoignons.
00:00:48 Donc ici, faites le diapo, c'est ce qui a été mis. Donc on va départager les méthodes témoignons.
00:00:53 Selon est-ce que la méthode est basée sur la solubilité de l'acide aminé, c'est-à-dire à quel point il doble en solvant.
00:01:01 Et la méthode est basée sur quelle propriété, sur la charge.
00:01:08 On a étudié les propriétés ou la définition des assieds aminés, mais ce sont des molécules qui peuvent être chargées, soit positivement, soit négativement.
00:01:16 Grâce à leur fonction amine NH2 qui va devenir NH3+, et leur fonction carboxylique COOH qui va devenir COO-.
00:01:26 Comme je vous ai dit, il y a une autre classification.
00:01:29 On peut classifier les méthodes selon est-ce que c'est une méthode chromatographique.
00:01:33 Et ici, on a mis "Galiméthode chromatographique".
00:01:36 Mais comme je l'ai déjà envoi, c'est le même principe, mais le support va être différent.
00:01:41 On a les méthodes chromatographiques qui sont chromatographiques sur papier, couche mince, CCM, en phase gazeuse, échangeuse d'ion et HPLC.
00:01:52 Mention spéciale pour les trois dernières, HPLC, échangeuse d'ion et phase gazeuse, qui sont des chromatographies sur colonne.
00:02:00 On va voir ça plus tard, on va détailler la chromatographie sur colonne qui fèche derrière.
00:02:07 Comme je vous l'ai dit, ce cours ne fait vraiment pas de sens.
00:02:11 Il y a deux principes qu'il faut comprendre.
00:02:13 La chromatographie, le principe de base, le principe physico-chimique qui fait changer.
00:02:18 Tu vas voir dans les types de chromatographie, c'est juste le support qui va différencier avec de légères différences.
00:02:27 Ensuite, il y a l'électroforesse.
00:02:29 L'électroforesse, tu dois savoir le principe de l'électroforesse, c'est-à-dire l'hydrogène qu'on a dans le terminal.
00:02:36 On l'a mis dans la deuxième unité de la protéine.
00:02:41 Tu dois bien te rappeler que c'est la deuxième unité de la protéine, parce que tu as mis l'électroforesse.
00:02:46 C'est l'hydrogène.
00:02:48 On va voir ça, je veux juste te rappeler les notions de l'hydrogène.
00:02:52 Donc, je vais te faire comprendre la chromatographie de manière générale.
00:02:58 Alors, la chromatographie, c'est quoi ?
00:03:02 C'est un procédé physico-chimique qui va permettre quoi ?
00:03:06 Qui va permettre de faire des éléments chimiques.
00:03:10 Je vais te parler de comment on fait ça.
00:03:12 Dans la chromatographie, il y a deux éléments qui sont indispensables.
00:03:18 Deux éléments, on a des phases. Et dans ces phases, il y a la phase stationnaire et la phase mobile.
00:03:28 Ils sont indispensables dans la chromatographie.
00:03:32 Quelle est la chromatographie ?
00:03:34 Tu vas voir, je vais te dire quelle est la phase stationnaire et quelle est la phase mobile.
00:03:39 Tu vas me dire, c'est quoi la phase stationnaire et la phase mobile.
00:03:43 Alors, la phase stationnaire, c'est quoi ?
00:03:46 Tu dois savoir quel est le procédé de chromatographie, comment on va réussir à séparer, à identifier, à séparer nos éléments chimiques.
00:03:56 En l'occurrence, on a nos acides aminés.
00:03:58 Comment ?
00:03:59 En fait, c'est très simple.
00:04:00 On va mettre nos échantillons, les échantillons qui sont les aïénades que nous voulons étudier.
00:04:06 On les met sur une phase stationnaire.
00:04:11 Donc, ça dépend. Soit on les met directement dans la phase stationnaire.
00:04:14 C'est quoi la phase stationnaire ? C'est un support qui reste fixe.
00:04:18 Un support qui reste fixe.
00:04:20 Un support qui reste stationnaire, c'est-à-dire qui reste fixe.
00:04:23 Soit on le met directement dans le support, soit je vais injecter, on va voir ça en bas de la chromatographie sur colonne,
00:04:30 soit je vais directement injecter les échantillons aïés pour les poser sur la phase stationnaire qui est, comme je te dis, un support qui reste fixe. Il ne bouge pas.
00:04:41 Alors, c'est quoi l'intérêt de mettre mes échantillons sur ma phase stationnaire ?
00:04:46 L'intérêt, c'est qu'on va trouver la phase mobile.
00:04:50 La phase mobile, c'est quoi ?
00:04:53 C'est généralement un solvant ou un gaz.
00:04:56 Ça dépend de la chromatographie.
00:04:58 Mais en tout cas, c'est quoi ?
00:05:00 C'est une matière qui va bouger.
00:05:02 Là, elle va se déplacer.
00:05:04 Elle va se déplacer sur quoi ?
00:05:05 Elle va se déplacer, elle va traverser la phase stationnaire.
00:05:08 Tu vois à peu près le procédé.
00:05:10 Je vais te dire ce que je veux dire.
00:05:12 Si je veux te dire le procédé, qui met les échantillons dans la phase stationnaire ?
00:05:18 J'aurai ma phase mobile qui va faire quoi ?
00:05:20 Ici, en l'occurrence, sur papier ou sur couche-main, c'est quoi ?
00:05:23 C'est un solvant.
00:05:25 Je vais te dire ce que je veux dire.
00:05:26 C'est ce solvant, c'est la phase mobile.
00:05:28 Et c'est quoi ?
00:05:29 Elle va se déplacer, elle va migrer.
00:05:32 Elle va migrer tout au long de quoi ?
00:05:34 De la phase stationnaire.
00:05:36 D'accord ?
00:05:37 Cette migration, elle va entraîner quoi, à ton avis ?
00:05:42 Maintenant, je vais te donner les échantillons.
00:05:44 Cette migration va entraîner une migration, un déplacement,
00:05:50 par exemple, des échantillons que j'ai envie d'identifier et de séparer.
00:05:54 Et du coup, je me demande,
00:05:57 cette migration,
00:05:59 ce déplacement de mes échantillons,
00:06:01 grâce à quoi ?
00:06:03 Grâce au déplacement de ma phase mobile sur ma phase stationnaire.
00:06:07 Est-ce que les échantillons,
00:06:09 si on les sépare,
00:06:10 ils ont la même distance de migration ?
00:06:12 Ils ont la même distance de migration.
00:06:15 Bien sûr que non.
00:06:16 Un élément chimique,
00:06:18 si on le sépare d'un autre élément chimique,
00:06:21 il aura quoi ?
00:06:22 Une distance de migration qui sera différente.
00:06:25 Eh oui, c'est le but de la chromatographie.
00:06:28 Donc, la chromatographie va permettre de séparer quoi ?
00:06:31 D'identifier et de séparer,
00:06:33 de séparer les éléments chimiques.
00:06:36 Nous, on sait ce qu'ils sont.
00:06:37 Ils sont les aménions.
00:06:39 Bien sûr que non.
00:06:40 Grâce à quoi ?
00:06:41 Grâce à la comparaison entre leurs distances de migration.
00:06:44 Oui, mais comment ça se fait, la migration ?
00:06:46 La migration, bien sûr,
00:06:48 grâce au déplacement, à la migration de la phase mobile
00:06:52 sur une phase stationnaire.
00:06:54 D'accord ?
00:06:55 C'est ce qui est le principe de chromatographie.
00:06:59 Il faut comprendre le principe
00:07:01 de quelle chromatographie il est plus facile.
00:07:04 D'accord ?
00:07:05 Bon.
00:07:06 On va commencer avec le premier type de chromatographie,
00:07:09 la chromatographie sur papier.
00:07:11 Pour cela, je ne vais pas
00:07:12 je ne vais pas utiliser la classification de ce diapo.
00:07:17 Je vais vous montrer les chromatographies,
00:07:20 les méthodes chromatographiques.
00:07:22 Et puis, je vais vous parler des méthodes de l'hygroforesse.
00:07:24 D'accord ?
00:07:25 Donc, pour ma chromatographie sur papier,
00:07:29 je vais vous parler de la chromatographie.
00:07:31 Vous vous demandez, c'est quoi ?
00:07:32 C'est un procédé qui va nous permettre de séparer,
00:07:34 de séparer les aménions entre eux.
00:07:38 Je vais séparer les aménions grâce à quoi ?
00:07:40 Grâce à leur distance de migration.
00:07:43 La différence entre leur distance de migration
00:07:45 et la distance de la migration entre eux,
00:07:47 va permettre de les identifier, de les séparer.
00:07:50 Alors, comme je vous ai dit,
00:07:51 cette migration se fait grâce à quoi ?
00:07:52 Grâce à une phase stationnaire,
00:07:54 une phase fixe,
00:07:55 et grâce à une phase mobile,
00:07:57 qui va permettre à la migration
00:07:59 qui va se déplacer,
00:08:00 qui va migrer.
00:08:01 C'est pour cela qu'on l'appelle la mobile.
00:08:04 En l'occurrence, sur papier,
00:08:05 ce sont les phases stationnaires
00:08:06 ou les phases mobiles.
00:08:08 La phase stationnaire, c'est quoi ?
00:08:11 C'est l'eau,
00:08:12 c'est l'eau,
00:08:13 c'est l'eau qui est dans le support,
00:08:17 qui est le papier de Wattman.
00:08:19 Vous avez vu ça dans le lycée ?
00:08:22 Qui a lu la chromatographie ?
00:08:23 Qui a lu cette chromatographie sur papier ?
00:08:25 Ils vous disent qu'on prend une feuille de papier de Wattman,
00:08:29 qu'on l'étale avec la main,
00:08:31 qu'on la met dans un solvant,
00:08:32 et que le solvant va sortir de la feuille de papier de Wattman,
00:08:35 et donc, ça va donner une migration.
00:08:36 Cette migration,
00:08:38 cette migration par capillarité,
00:08:40 c'est ce que je vous ai dit.
00:08:41 Cette migration par solvant,
00:08:42 elle va entraîner quoi ?
00:08:43 Elle va entraîner la migration des échantillons.
00:08:46 En l'occurrence, c'est les acides aminés.
00:08:49 Donc, je t'ai dit que la phase stationnaire, c'est l'eau,
00:08:54 l'eau qui est dans la feuille de papier de Wattman.
00:08:57 Ici, si vous vous en souciez,
00:08:59 vous allez trouver une variante de ce diapo,
00:09:02 où dans ce schéma,
00:09:03 ils ont dessiné l'eau.
00:09:07 C'est-à-dire que la feuille de Wattman,
00:09:08 ils l'ont mis avant de la trouver dans le solvant.
00:09:11 Donc, ne confondez pas dans ce schéma.
00:09:13 Ce qui est en bleu clair, c'est l'eau.
00:09:15 C'est l'eau qui est contenue dans la feuille de papier de Wattman.
00:09:17 Et ce qui est en foncé,
00:09:19 ce sont les deux bleus foncés,
00:09:21 c'est quoi ?
00:09:22 C'est le solvant qui est là,
00:09:23 qui est la phase mobile.
00:09:25 Donc, la phase mobile, c'est quoi ?
00:09:27 C'est un éluant.
00:09:28 C'est un solvant aqueux organique.
00:09:31 D'accord ?
00:09:32 Et du coup, le principe de la chromatographie sur papier est simple.
00:09:36 On prend une feuille de papier de Wattman,
00:09:37 on fait un échantillon,
00:09:39 on le met, on le tire,
00:09:41 on le remet à l'eau,
00:09:43 on le remet à l'eau,
00:09:44 dans le solvant organique,
00:09:47 qui est la phase mobile.
00:09:48 Si vous voulez, vous pouvez prendre du papier absorbant,
00:09:50 du papier essuie,
00:09:51 ou vous le mettez dans le chenot,
00:09:53 mais si vous ne l'avez pas,
00:09:54 ce n'est pas le cas.
00:09:55 L'eau va sortir du papier.
00:09:56 Et du coup, ce n'est pas le cas.
00:09:57 L'eau va sortir du papier.
00:09:59 Donc, ici, c'est la même chose.
00:10:00 Le solvant va sortir du papier de Wattman.
00:10:02 Et c'est ça, la migration.
00:10:04 Donc, ça, c'est le principe de la chromatographie sur papier.
00:10:08 Alors, je vais vous dire ici,
00:10:09 comment on va pouvoir différencier les acides aminés,
00:10:12 comment on va voir comment la migration des acides aminés va pouvoir les différencier.
00:10:16 Je vais vous le montrer.
00:10:17 La migration, c'est une migration par capillarité.
00:10:21 C'est-à-dire,
00:10:22 on va le voir ici,
00:10:23 les acides aminés hydrophobes,
00:10:26 je vous l'ai dit,
00:10:27 ils vont migrer plus.
00:10:29 Alors que ceux qui sont hydrophiles,
00:10:31 ils vont migrer moins.
00:10:32 Vous allez dire, "mais pourquoi ?"
00:10:33 Je vais vous dire pourquoi.
00:10:34 On a dit que la face stationnaire de ces acides aminés,
00:10:37 je vous le répète,
00:10:38 la face stationnaire de ces acides aminés, c'est l'eau.
00:10:40 C'est l'eau du papier de Wattman.
00:10:43 Si un acide aminé ou un élément chimique est hydrophile,
00:10:47 il aime l'eau.
00:10:48 Ça veut dire quoi ?
00:10:49 Il est hydrophile, il aime l'eau.
00:10:51 Donc, il aime l'eau qui est la face stationnaire.
00:10:54 Il aime la face stationnaire.
00:10:56 Est-ce qu'il va migrer ?
00:10:57 Est-ce qu'il va bouger ?
00:10:58 Il ne va pas bouger.
00:10:59 Pourquoi ?
00:11:00 Parce qu'il a du plaisir dans la face stationnaire
00:11:03 parce qu'il est hydrophile.
00:11:05 D'accord ?
00:11:06 À l'inverse, un acide aminé qui est,
00:11:08 ou un élément chimique de manière générale,
00:11:10 pour ma chromatographie,
00:11:11 il est hydrophobe.
00:11:13 Il est hydrophobe, mais il n'aime pas l'eau.
00:11:15 Il est peu soluble dans l'eau.
00:11:17 Ça veut dire quoi ?
00:11:18 Ça veut dire qu'il a du plaisir dans le solvant.
00:11:21 Il a du plaisir dans la face mobile.
00:11:25 Vous comprenez ?
00:11:26 Il est plus soluble dans la face mobile
00:11:28 que dans la face stationnaire.
00:11:31 Donc, il ne va pas aimer l'eau,
00:11:33 mais il aime la face stationnaire.
00:11:34 Il va aimer la face mobile.
00:11:35 Il ne va pas bouger.
00:11:36 Il va migrer plus.
00:11:37 Il va migrer plus.
00:11:38 C'est pour ça que les acides aminés qui sont hydrophobes,
00:11:41 ce sont ceux qui vont migrer le plus.
00:11:43 Alors que ceux qui sont hydrophiles,
00:11:45 ils aiment l'eau.
00:11:46 L'eau est la face stationnaire.
00:11:47 Ils restent dans leur lieu.
00:11:48 Ils se sentent bien.
00:11:50 D'accord ?
00:11:51 Alors, il y a un détail aussi.
00:11:55 C'est que la chromatographie,
00:11:57 je ne sais pas si vous voyez,
00:11:58 ça c'est un détail,
00:11:59 ça permet de chromatographier les gens
00:12:01 parce qu'on utilise des colorants ici.
00:12:03 On utilise une coloration
00:12:04 pour que les gens soient entourés.
00:12:06 Donc, il y a une propriété.
00:12:08 Comment on voit le truc qui a une propriété
00:12:11 avec les couleurs des acides aminés ?
00:12:13 C'est la nitrogène.
00:12:14 C'est pour ça que la chromatographie sur papier
00:12:17 donne la coloration avec la nitrogène.
00:12:20 D'accord ?
00:12:21 Alors, pour comparer,
00:12:23 pour comparer leur distance,
00:12:25 on a deux, deux quoi ?
00:12:27 Deux valeurs.
00:12:29 Deux valeurs mathématiques.
00:12:30 Deux rapports mathématiques.
00:12:32 Est-ce que nous pouvons comparer,
00:12:34 nous pouvons comparer,
00:12:35 je vais vous montrer le schéma en dessous,
00:12:36 est-ce que nous pouvons comparer
00:12:37 la distance de migration des acides aminés ?
00:12:39 Je vais vous montrer bien le schéma.
00:12:41 Est-ce que nous pouvons comparer
00:12:42 la distance de migration des acides aminés
00:12:45 avec quoi ?
00:12:46 Avec la distance de l'hégéra
00:12:48 de la solvente,
00:12:49 de la phase mobile.
00:12:50 On peut ?
00:12:51 Donc, là, je fais petit H sur grand H.
00:12:53 Ce rapport-là,
00:12:55 comment je l'ai dit ?
00:12:56 Ça, c'est le rapport qui fèche,
00:12:58 le rapport au front.
00:13:00 C'est le RF.
00:13:02 Ce RF, les gens, il est très important
00:13:04 parce que c'est lui qui est le plus utilisé,
00:13:05 c'est le rapport qui est le plus utilisé.
00:13:07 Pourquoi ?
00:13:08 Pour identifier mon acide aminé
00:13:11 ou là, mon élément chimique.
00:13:12 C'est-à-dire qu'il faut savoir
00:13:13 que chaque acide aminé a son RF,
00:13:15 a une distance de migration,
00:13:17 a une distance de l'hégéra.
00:13:19 Ce rapport au front, c'est quoi ?
00:13:21 C'est la distance de l'acide aminé
00:13:23 au front,
00:13:24 la division au front,
00:13:25 la distance de l'hégéra
00:13:27 de mon solvente.
00:13:28 D'accord ?
00:13:29 Quand mon acide aminé est soluble
00:13:32 dans le solvente,
00:13:33 je dis bien soluble au front,
00:13:35 dans le solvente,
00:13:36 dans la phase mobile,
00:13:37 quand son RF va sortir,
00:13:39 il va aller vers 1
00:13:42 vu que c'est ce rapport mathématique.
00:13:45 C'est la division,
00:13:46 c'est du coup, le rapport.
00:13:48 Donc, le maximum de l'acide aminé,
00:13:50 c'est le 1.
00:13:51 Et le minimum, c'est le 0.
00:13:53 Donc, on est entre 0 et 1 déjà.
00:13:55 Donc, si le soluté est là,
00:13:57 l'acide aminé,
00:13:58 ou l'élément chimique,
00:14:00 c'est la chromatographie.
00:14:01 Si le soluté est là,
00:14:03 il est soluble dans la phase mobile,
00:14:05 en l'occurrence,
00:14:06 ici, c'est mon solvente organique,
00:14:09 c'est ça ?
00:14:10 Son RF va être en haut
00:14:12 et il va être à 1.
00:14:14 A l'inverse,
00:14:15 si mon acide aminé est soluble,
00:14:18 c'est mon solvente organique,
00:14:20 soluble dans le mois,
00:14:22 dans la phase stationnaire.
00:14:24 Ce n'est pas ça.
00:14:25 La migration thermique n'est pas là.
00:14:27 Donc, son RF est consoluble.
00:14:30 C'est logique.
00:14:32 D'accord ?
00:14:33 Il y a une autre valeur,
00:14:34 on va dire qu'il y a deux rapports.
00:14:36 Le deuxième rapport,
00:14:37 il n'est pas là,
00:14:38 mais il faut le savoir,
00:14:40 c'est le RT,
00:14:41 c'est le rapport intime.
00:14:42 Je t'ai dit qu'on peut comparer,
00:14:44 on peut comparer,
00:14:45 on peut faire la distance de migration
00:14:47 therme d'acide aminé
00:14:48 avec la distance de migration
00:14:50 thermo-solvente.
00:14:52 Je peux comparer
00:14:54 la distance de migration
00:14:56 thermo-acide aminé
00:14:57 avec la distance de migration
00:14:58 therme d'un autre acide aminé
00:15:00 ou therme d'un autre témoin,
00:15:01 therme d'un autre élément chimique.
00:15:03 D'accord ?
00:15:04 C'est ça le rapport au témoin.
00:15:06 Donc, tu vas me dire,
00:15:07 oui, c'est un RT,
00:15:08 vu que tu peux comparer
00:15:09 avec un témoin.
00:15:10 Et le témoin, ça peut être
00:15:11 un autre acide aminé
00:15:13 ou un autre élément chimique
00:15:14 ou autre.
00:15:15 Donc, il y a plusieurs RT,
00:15:16 donc ça va dépendre
00:15:17 de l'acide aminé.
00:15:18 Donc le RT,
00:15:19 tu as avec l'acide aminé
00:15:20 et le témoin que tu vas utiliser.
00:15:22 C'est pour ça qu'on n'utilise pas
00:15:23 beaucoup le RT,
00:15:24 parce qu'il y en a beaucoup
00:15:25 et du coup, ça dépend
00:15:26 de l'acide que tu as dans le labo.
00:15:28 D'accord ?
00:15:29 On utilise beaucoup plus le RF.
00:15:31 D'accord ?
00:15:32 Donc, c'était tout
00:15:33 pour la chromatographie sur papier.
00:15:35 Regarde,
00:15:36 sur couche mince,
00:15:37 on ne va pas en mettre beaucoup.
00:15:38 Sur couche mince,
00:15:39 on ne va pas en mettre beaucoup
00:15:40 parce que c'est la même chose,
00:15:42 il n'y a qu'une seule différence.
00:15:44 Regarde,
00:15:45 le support,
00:15:46 le support est ici,
00:15:48 mais je ne sais pas pourquoi.
00:15:49 Le support est ici,
00:15:50 mais je ne sais pourquoi.
00:15:51 Mon papier de Wattman,
00:15:53 j'aurai quoi ?
00:15:54 J'aurai une plaque chromatographique.
00:15:58 Regarde la plaque chromatographique,
00:15:59 les gens,
00:16:00 c'est une plaque,
00:16:01 celle-ci,
00:16:02 c'est une plaque,
00:16:03 celle-ci,
00:16:04 elle est composée
00:16:05 de verre ou d'aluminium.
00:16:07 Ça dépend.
00:16:08 Généralement,
00:16:09 on aime utiliser le verre,
00:16:10 mais on peut utiliser l'aluminium.
00:16:11 Donc, c'est une plaque chromatographique.
00:16:13 Est-ce que c'est une plaque
00:16:14 qui est à l'intérieur
00:16:15 de la face stationnaire ?
00:16:16 Non.
00:16:17 La plaque, c'est un support.
00:16:18 La face stationnaire,
00:16:19 c'est quoi ?
00:16:20 Ce sera un gel
00:16:21 qu'on va tapisser
00:16:22 tout au long de la plaque.
00:16:23 On appelle ça
00:16:24 le gel de silice.
00:16:27 On appelle ça
00:16:28 le gel de silice.
00:16:29 Donc,
00:16:30 ma face stationnaire,
00:16:31 ce sera quoi ?
00:16:32 Ce sera le gel de silice
00:16:34 que les gens
00:16:35 font sur cette plaque chromatographique,
00:16:38 sur cette plaque chromatographique
00:16:39 qui est faite de verre.
00:16:40 Donc,
00:16:41 il faut qu'il y ait de la plaque chromatographique
00:16:43 qui est faite de verre
00:16:44 ou d'aluminium,
00:16:45 ça dépend.
00:16:46 D'accord ?
00:16:47 Voilà.
00:16:48 Le reste,
00:16:49 c'est la même chose.
00:16:50 La chromatographie sur couche mince,
00:16:51 je vais vous expliquer
00:16:52 ce que je veux vous dire
00:16:53 sur papier.
00:16:54 Comment ?
00:16:55 C'est quelque chose ou c'est autre chose ?
00:16:56 Déjà,
00:16:57 j'ai le même principe
00:16:58 qu'est la chromatographie.
00:16:59 Donc,
00:17:00 avoir une face stationnaire,
00:17:01 avoir une face mobile,
00:17:02 je mets mes échantillons,
00:17:03 nous sommes en migration,
00:17:05 la migration par capillarité,
00:17:07 c'est ça ?
00:17:08 C'est un morceau de vent
00:17:09 qui va entraîner la migration
00:17:10 de mes échantillons.
00:17:11 Cette distance de migration
00:17:12 de mes acides aminés,
00:17:13 de mes éléments chimiques,
00:17:14 de mes échantillons,
00:17:15 elle va me permettre
00:17:16 de comparer,
00:17:17 de comparer entre eux,
00:17:18 et du coup,
00:17:19 de comparer entre eux,
00:17:20 soit avec un T-
00:17:21 soit avec un R-
00:17:22 avec la distance de migration
00:17:23 de la face mobile.
00:17:24 Et du coup,
00:17:25 je vais pouvoir identifier
00:17:26 et différencier
00:17:27 les aminés
00:17:28 pour les voir
00:17:29 dans les échantillons
00:17:30 de la même face stationnaire.
00:17:31 C'est le même principe.
00:17:32 Donc,
00:17:33 je vais pouvoir
00:17:34 identifier
00:17:35 et différencier
00:17:36 les aminés
00:17:37 de la même face stationnaire
00:17:38 et de la même face mobile.
00:17:39 C'est le même principe.
00:17:40 La seule différence,
00:17:41 les gens,
00:17:42 la seule différence,
00:17:43 c'est le support.
00:17:44 Au lieu d'avoir
00:17:45 un papier,
00:17:46 le papier de Wattman,
00:17:47 ou la face stationnaire
00:17:48 qui est le mâle
00:17:49 qui est le papier.
00:17:50 Là,
00:17:51 j'ai une plaque,
00:17:52 une plaque en quoi ?
00:17:53 Une plaque en verre
00:17:54 ou en aluminium
00:17:55 qui est assez mince
00:17:56 et du coup,
00:17:57 je vais mettre
00:17:58 du gel de silice pour ça.
00:17:59 Et ce sera
00:18:00 le gel de silice
00:18:01 pour ma face stationnaire.
00:18:02 Bon,
00:18:03 on va voir comment
00:18:04 on fait
00:18:05 sur une couche mince.
00:18:06 Elle est
00:18:07 moins archaïque
00:18:08 que celle sur papier.
00:18:09 Elle donne
00:18:10 de meilleurs résultats.
00:18:11 Mais ce n'est pas
00:18:12 le top du top.
00:18:13 Le top du top,
00:18:14 on va voir,
00:18:15 c'est le "chirga".
00:18:16 OK ?
00:18:17 C'était
00:18:18 les deux chromatographies.
00:18:19 Donc ici,
00:18:20 on va voir un petit exemple.
00:18:21 Cet exemple,
00:18:22 je ne comprends pas
00:18:23 ce qu'il y a.
00:18:24 Parce que quelqu'un
00:18:25 qui a fait ça,
00:18:26 je ne comprends pas.
00:18:27 Donc,
00:18:28 imaginez
00:18:29 que vous trouviez
00:18:30 Wassim
00:18:31 qui en tant que médecin
00:18:32 ne s'entend pas.
00:18:33 Imaginez que je fais
00:18:34 spécialité biochimiste
00:18:35 ou là,
00:18:36 je m'en fous,
00:18:37 on dirait un truc
00:18:38 dans le labo.
00:18:39 Voilà, dans le labo.
00:18:40 Et ils vous disent,
00:18:41 vous ne le savez pas,
00:18:42 ils vous disent en tant que médecin
00:18:43 qui est dans le labo,
00:18:44 ils vous donnent
00:18:45 un échantillon.
00:18:46 Un échantillon
00:18:47 qui est
00:18:48 de la maladie.
00:18:49 De la maladie.
00:18:50 Imaginons
00:18:51 que c'est un échantillon
00:18:52 de l'urine.
00:18:53 Un échantillon d'urine
00:18:54 de la maladie.
00:18:55 Vous savez ce que
00:18:56 vous allez faire ?
00:18:57 J'ai envie de savoir,
00:18:58 en tant que médecin,
00:18:59 j'ai envie de savoir
00:19:00 les acides aminés
00:19:01 qui sont
00:19:02 dans l'urine
00:19:03 de la maladie.
00:19:04 D'accord ?
00:19:06 Le fait de savoir
00:19:07 les acides aminés
00:19:08 qui sont dans l'urine
00:19:09 de la maladie,
00:19:10 ça va me permettre
00:19:11 de quoi ?
00:19:12 De diagnostiquer
00:19:13 une maladie.
00:19:14 Par exemple,
00:19:15 si j'ai des acides aminés
00:19:16 plus fort que normal.
00:19:17 Donc,
00:19:18 on a aussi une dernière.
00:19:19 Si je veux faire
00:19:20 ma chromatographie
00:19:21 par exemple sur papier,
00:19:22 dans le labo,
00:19:23 je n'ai pas les moyens
00:19:24 de faire une chromatographie
00:19:25 sur papier
00:19:26 ou sur papier.
00:19:27 C'est important.
00:19:28 Qu'est-ce que je vais faire ?
00:19:29 Je vais utiliser
00:19:30 des étalons
00:19:31 et
00:19:32 dans mon exemple,
00:19:34 ce que je vais utiliser,
00:19:35 un échantillon
00:19:36 qui est un mec malade.
00:19:37 Je peux utiliser
00:19:38 un échantillon
00:19:39 qui est un témoin.
00:19:40 Alors,
00:19:41 c'est quoi un étalon ?
00:19:42 C'est quoi un témoin ?
00:19:43 C'est quoi malade ?
00:19:44 Le malade,
00:19:45 c'est l'échantillon
00:19:46 que je veux faire.
00:19:47 L'échantillon
00:19:48 à étudier.
00:19:49 L'échantillon
00:19:50 qui est la maladie.
00:19:51 L'exemple est celui-ci.
00:19:52 Dans le labo,
00:19:53 on a le témoin
00:19:54 qui est l'urine
00:19:55 d'une personne malade.
00:19:56 On suspecte
00:19:57 quelque chose
00:19:58 dans l'urine
00:19:59 mais on considère
00:20:00 qu'elle est malade.
00:20:01 On considère
00:20:02 qu'elle est malade.
00:20:03 D'accord.
00:20:04 Je vais ramener
00:20:05 première dessus,
00:20:06 je vais ramener
00:20:07 des étalons.
00:20:08 C'est quoi les étalons ?
00:20:09 Ce sont,
00:20:10 dans mon cas,
00:20:11 des acides aminés.
00:20:12 On les connait.
00:20:13 Ce sont des acides.
00:20:14 Ce sont des acides aminés
00:20:15 que je connais.
00:20:16 On les connait
00:20:17 à distance
00:20:18 de chromatographie.
00:20:19 On les connait
00:20:20 par exemple
00:20:21 avec le rose.
00:20:22 Je ne sais pas
00:20:23 ce rouge.
00:20:24 C'est de l'alaline.
00:20:25 Ce rouge,
00:20:26 je ne sais pas,
00:20:27 c'est de l'acide aspartic.
00:20:28 Ce bleu,
00:20:29 c'est de l'alizine.
00:20:30 Donc,
00:20:31 mes étalons,
00:20:32 ce sont quoi ?
00:20:33 Ce sont des acides aminés
00:20:34 ou des éléments chimiques
00:20:35 que nous connaissons.
00:20:36 Je les connais.
00:20:37 Je vais les utiliser
00:20:38 pour comparer
00:20:39 les éléments
00:20:40 qui sont dans
00:20:41 l'échantillon malade.
00:20:42 Vous allez dire
00:20:43 "Ok, oui c'est ça.
00:20:44 Donc, je vais étudier
00:20:45 cet échantillon malade
00:20:46 avec ces étalons
00:20:47 et je vais comparer.
00:20:48 Qu'est-ce que c'est
00:20:49 qu'un témoin dans l'espace ?
00:20:50 Qu'est-ce que c'est qu'un dérobé ?
00:20:51 Le témoin,
00:20:52 c'est aussi un échantillon.
00:20:53 C'est aussi un échantillon.
00:20:54 Mais,
00:20:55 on ne va pas l'étudier
00:20:56 "au début".
00:20:57 Au début,
00:20:58 on va l'utiliser
00:20:59 pour comparer
00:21:00 les éléments
00:21:01 malades.
00:21:02 Dans l'exemple,
00:21:03 je vais vous montrer.
00:21:04 Je vais vous mettre dans le labo.
00:21:05 Ils vous disent
00:21:06 "un échantillon d'urine
00:21:07 de
00:21:08 un malade".
00:21:09 Tu te dis
00:21:10 "Ok, je vais étudier
00:21:11 cet échantillon
00:21:12 pour voir
00:21:13 les acides aminés
00:21:14 qui sont dedans.
00:21:15 Je vais prendre
00:21:16 mes étalons
00:21:17 qui sont des acides aminés
00:21:18 qui sont normalement
00:21:19 dans l'urine.
00:21:20 Ils sont dans l'urine.
00:21:21 Pour comparer,
00:21:22 je vais utiliser
00:21:23 un échantillon d'urine
00:21:24 pour comparer
00:21:25 cet étalon malade
00:21:26 avec
00:21:27 cet échantillon d'urine
00:21:28 d'un malade
00:21:29 qui n'est pas malade
00:21:30 mais qui est en santé.
00:21:31 On va lui donner
00:21:32 le témoin.
00:21:33 Et du coup,
00:21:34 cet échantillon malade,
00:21:35 je vais le comparer
00:21:36 avec le témoin
00:21:37 avec mes étalons.
00:21:38 Je vais le comparer
00:21:39 avec le témoin
00:21:40 avec mes étalons.
00:21:41 Ça va donner ça.
00:21:42 Regardez.
00:21:43 Donc,
00:21:44 on a mis le malade
00:21:45 à droite.
00:21:46 On a mis le témoin
00:21:47 ici,
00:21:48 dans le labo
00:21:49 et les étalons
00:21:50 aussi.
00:21:51 Les étalons sont
00:21:52 des éléments chimiques
00:21:53 ou des acides aminés
00:21:54 ici
00:21:55 et là,
00:21:56 on sait
00:21:57 la distance
00:21:58 de l'hécarter.
00:21:59 Je sais que l'étalon 1
00:22:00 est ici.
00:22:01 On sait ce que c'est.
00:22:02 L'étalon 2,
00:22:03 on sait ce que c'est.
00:22:04 L'étalon 3,
00:22:05 on sait ce que c'est.
00:22:06 Les deux échantillons
00:22:07 qui sont malades
00:22:08 ou témoins,
00:22:09 si on sait
00:22:10 qu'il y a un bois
00:22:11 dans la même distance,
00:22:12 dans la même ligne
00:22:13 d'un étalon,
00:22:14 je sais que,
00:22:15 du coup,
00:22:16 ce bois,
00:22:17 ça veut dire
00:22:18 que c'est l'acide aminé
00:22:19 que j'ai.
00:22:20 Si l'étalon 2
00:22:21 était quoi ?
00:22:22 C'était l'acide aspartic.
00:22:23 Mais dans ce bois,
00:22:24 si j'étais un témoin
00:22:25 et que j'étais malade,
00:22:26 je serais dans l'acide aspartic
00:22:27 dans cet échantillon.
00:22:28 D'accord ?
00:22:29 Ici,
00:22:30 on a le point
00:22:31 de l'étalon 3
00:22:32 qui est le bois
00:22:33 que j'ai dit
00:22:34 que j'ai mis au bois.
00:22:35 Et là,
00:22:36 ça veut dire
00:22:37 que mon malade
00:22:38 et mon témoin,
00:22:39 les deux échantillons
00:22:40 que je leur ai appris,
00:22:41 ont un bois.
00:22:42 Comment ?
00:22:43 Ici,
00:22:44 l'étalon 1,
00:22:45 l'étalon 1,
00:22:46 c'est plutôt
00:22:47 que j'étais malade.
00:22:48 Ah !
00:22:49 Ici,
00:22:50 c'est intéressant.
00:22:51 Comme je te l'ai dit,
00:22:52 le témoin
00:22:53 est un témoin
00:22:54 qui est plus malade
00:22:55 que le témoin
00:22:56 qui est plus malade.
00:22:57 Donc,
00:22:58 c'est un témoin
00:22:59 qui est plus malade
00:23:00 que le témoin
00:23:01 qui est plus malade.
00:23:02 Donc,
00:23:03 c'est un témoin
00:23:04 qui est plus malade
00:23:05 que le témoin
00:23:06 qui est plus malade.
00:23:07 Donc,
00:23:08 c'est un témoin
00:23:09 qui est plus malade
00:23:10 que le témoin
00:23:11 qui est plus malade.
00:23:12 Donc,
00:23:13 c'est un témoin
00:23:14 qui est plus malade
00:23:15 que le témoin
00:23:16 qui est plus malade.
00:23:17 Donc,
00:23:18 c'est un témoin
00:23:19 qui est plus malade
00:23:20 que le témoin
00:23:21 qui est plus malade.
00:23:22 Donc,
00:23:23 voilà.
00:23:24 Donc,
00:23:25 généralement,
00:23:26 dans la chromatographie,
00:23:27 je vais utiliser
00:23:28 l'échantillon
00:23:29 qui a été étudié.
00:23:30 Je vais prendre
00:23:31 un deuxième échantillon
00:23:32 que l'on va comparer
00:23:33 avec des étalons
00:23:34 qui sont des éléments chimiques,
00:23:35 des enceintes chimiques
00:23:36 ou des aminés.
00:23:37 Pour les connaître,
00:23:38 pour les comparer,
00:23:39 on compare.
00:23:40 Si on les met
00:23:41 dans la même zone,
00:23:42 dans la même distance
00:23:43 de migration,
00:23:44 on les connaît
00:23:45 et du coup,
00:23:46 c'est la même chose.
00:23:47 C'est le même
00:23:48 échantillon
00:23:49 que celui-ci.
00:23:50 Le même échantillon
00:23:51 que celui-ci.
00:23:52 Le même acide aminé
00:23:53 que celui-ci.
00:23:54 D'accord ?
00:23:55 C'est ce qu'on a.
00:23:56 Alors,
00:23:57 l'électrophorese
00:23:58 et l'électrofocalisation
00:23:59 on va en parler plus tard.
00:24:00 Je vais vous expliquer
00:24:01 les méthodes chromatographiques.
00:24:02 Donc,
00:24:03 ce que tu viens de faire,
00:24:04 c'est d'utiliser
00:24:05 deux chromatographies.
00:24:06 Une chromatographie
00:24:07 sur papier
00:24:08 et sur couche mince.
00:24:09 Tu as trois autres.
00:24:10 Ce sont
00:24:11 les chromatographies
00:24:12 face-gazeuse,
00:24:13 les chromatographies
00:24:14 échangeuse-dillon
00:24:15 et les chromatographies
00:24:16 qui s'appliquent
00:24:17 à haute pression.
00:24:18 Haute pression,
00:24:19 haute performance,
00:24:20 c'est-à-dire
00:24:21 l'HPLC
00:24:22 qui est la plus utilisée
00:24:23 et la meilleure d'ailleurs.
00:24:24 Peut-être le meilleur
00:24:25 entre les deux pour la fin.
00:24:26 Ces deux magasins
00:24:27 sont des chromatographies
00:24:28 sur colle.
00:24:29 Ce sont des chromatographies
00:24:30 sur colle.
00:24:31 Tu te dis,
00:24:32 "Oui, c'est..."
00:24:33 "Ça veut dire quoi
00:24:34 "chromatographie sur colle ?"
00:24:35 Tu connais
00:24:36 c'est quoi la chromatographie ?
00:24:37 Je te l'ai expliqué.
00:24:38 Le principe
00:24:39 de la chromatographie
00:24:40 c'est quoi ?
00:24:41 C'est du coup,
00:24:42 on va séparer
00:24:43 des éléments chimiques
00:24:44 grâce à quoi ?
00:24:45 Grâce à
00:24:46 la distance de la hiérarchie.
00:24:47 Donc,
00:24:48 la migration,
00:24:49 la migration,
00:24:50 comment elle se fait ?
00:24:51 Elle se fait avec
00:24:52 une phase mobile
00:24:53 qui va se déplacer
00:24:54 qui va entraîner
00:24:55 des échantillons
00:24:56 et ces échantillons
00:24:57 et cette phase mobile
00:24:58 vont se déplacer
00:24:59 sur la phase stationnaire
00:25:00 et la place fixe.
00:25:01 Ici,
00:25:02 la chromatographie
00:25:03 sur colonne,
00:25:04 de manière générale,
00:25:05 on va utiliser
00:25:06 une phase stationnaire
00:25:07 qui va être
00:25:08 une colonne.
00:25:09 Alors,
00:25:10 ce qui est
00:25:11 phase stationnaire,
00:25:12 c'est où je suis
00:25:13 au-delà de la colonne.
00:25:14 La colonne,
00:25:15 c'est un support.
00:25:16 La colonne,
00:25:17 c'est un support,
00:25:18 les gens.
00:25:19 Donc,
00:25:20 la phase stationnaire,
00:25:21 c'est où je suis
00:25:22 derrière la colonne.
00:25:23 La phase interne
00:25:24 à la colonne intérieure.
00:25:25 D'accord ?
00:25:26 Donc,
00:25:27 le même principe.
00:25:28 J'ai une phase mobile
00:25:29 qui est,
00:25:30 par exemple,
00:25:31 c'est un liquide,
00:25:32 un solvant,
00:25:33 un liquide organique.
00:25:34 Je vais faire quoi ?
00:25:35 Je vais le pomper
00:25:36 ou le baiter,
00:25:37 ou ne baiter pas,
00:25:38 le baiter à la phase stationnaire.
00:25:39 Donc,
00:25:40 ma phase mobile,
00:25:41 elle va se déplacer,
00:25:42 elle va se déplacer
00:25:43 tout au long
00:25:44 de ma phase stationnaire.
00:25:45 Donc,
00:25:46 je vais mettre
00:25:47 mon échantillon
00:25:48 dans la phase stationnaire
00:25:49 en même temps
00:25:50 que je vais baiter
00:25:51 ma phase mobile.
00:25:52 C'est ça le principe
00:25:53 de chromatographie.
00:25:54 Jusque là,
00:25:55 c'est normal.
00:25:56 Maintenant,
00:25:57 ce qui va différencier
00:25:58 ce que j'ai vu
00:25:59 de l'arrière,
00:26:00 c'est qu'il y a
00:26:01 des choses
00:26:02 que je ne vais pas voir,
00:26:03 je ne vais pas les voir
00:26:04 à distance.
00:26:05 Je ne vais pas les voir
00:26:06 à distance
00:26:07 parce que
00:26:08 je ne vais pas
00:26:09 les voir
00:26:10 à distance.
00:26:11 Donc,
00:26:12 je vais mettre
00:26:13 mon échantillon
00:26:14 dans la distance
00:26:15 de la migration
00:26:16 de mes échantillons
00:26:17 de mes acides aminés.
00:26:18 Et ce que je vais dire,
00:26:19 vu que c'est une colonne
00:26:20 qui est verticale,
00:26:21 elle va tomber,
00:26:22 elle va descendre,
00:26:23 elle va se déplacer
00:26:24 dans la phase stationnaire.
00:26:25 La différence,
00:26:26 c'est quoi ?
00:26:27 C'est qu'il y a ici,
00:26:28 on va diminuer le temps
00:26:29 avant de diminuer la distance.
00:26:30 Donc,
00:26:31 on va diminuer le temps.
00:26:32 On va diminuer
00:26:33 le temps
00:26:34 qu'il faut
00:26:35 pour chaque,
00:26:36 pour chaque échantillon,
00:26:37 pour chaque acide aminé
00:26:38 pour qu'il ne sorte
00:26:39 de la colonne.
00:26:40 Donc,
00:26:41 on va diminuer
00:26:42 le temps
00:26:43 avant de sortir
00:26:44 de la colonne.
00:26:45 Et du coup,
00:26:46 il y aura une différence
00:26:47 de temps
00:26:48 entre les acides aminés
00:26:49 et les échantillons.
00:26:50 Je regarde l'exemple.
00:26:51 Ce rouge,
00:26:52 il a pris 20 minutes
00:26:53 pour sortir.
00:26:54 Ce bleu,
00:26:55 cet échantillon bleu,
00:26:56 il a pris 30 minutes.
00:26:57 Ce bleu clair,
00:26:58 c'est un bleu clair.
00:26:59 C'est un bleu foncé,
00:27:00 c'est un bleu clair.
00:27:01 Il a pris
00:27:02 plus de 50 minutes
00:27:03 pour sortir.
00:27:04 Donc,
00:27:05 la différence
00:27:06 de temps
00:27:07 entre,
00:27:08 la différence de temps
00:27:09 de sortie
00:27:10 de mes échantillons
00:27:11 ou de mes acides aminés
00:27:12 va induire quoi ?
00:27:13 Ça va me dire du coup
00:27:14 que j'ai une différence
00:27:15 de composition.
00:27:16 Ce n'est pas
00:27:17 les mêmes composés chimiques.
00:27:18 Et voilà,
00:27:19 on a donné du coup,
00:27:20 c'est ça le principe
00:27:21 de chromatographie.
00:27:22 OK,
00:27:23 on a donné le principe
00:27:24 de chromatographie
00:27:25 sur une colonne.
00:27:26 Donc,
00:27:27 on va dire que c'est ça.
00:27:28 Donc,
00:27:29 on va dire que c'est ça.
00:27:30 C'est bien.
00:27:31 Donc,
00:27:32 on va retirer
00:27:33 les acides aminés.
00:27:34 Donc,
00:27:35 je vais pouvoir
00:27:36 les séparer
00:27:37 parce que du coup,
00:27:38 comme je l'ai dit,
00:27:39 les acides aminés,
00:27:40 à la chasse
00:27:41 de la solubilité
00:27:42 des acides aminés,
00:27:43 à la chasse
00:27:44 de l'affinité
00:27:45 des acides aminés
00:27:46 avec la phase mobile.
00:27:47 À la chasse
00:27:48 de l'affinité
00:27:49 et de la solubilité
00:27:50 des acides aminés
00:27:51 avec la phase mobile,
00:27:52 eh bien,
00:27:53 tout le monde
00:27:54 ne va pas
00:27:55 prendre le temps
00:27:56 de se séparer
00:27:57 de la phase stationnaire.
00:27:58 Il doit être
00:27:59 très très soluble.
00:28:00 Très très soluble
00:28:01 et quoi ?
00:28:02 Il doit être
00:28:03 très très soluble.
00:28:04 Pourquoi ?
00:28:05 Dans la
00:28:06 phase mobile.
00:28:07 Si il est plus soluble
00:28:08 et quoi ?
00:28:09 Si il est plus soluble
00:28:10 et quoi ?
00:28:11 Dans la phase mobile,
00:28:12 il va être
00:28:13 très très soluble.
00:28:14 Il va être très très soluble.
00:28:15 La solubilité
00:28:16 de la phase mobile
00:28:17 à la chasse de la colonne,
00:28:18 si elle est soluble
00:28:19 et qu'elle a une bonne
00:28:20 affinité avec la solubilité,
00:28:21 elle va être très très soluble.
00:28:22 Donc, le temps
00:28:23 de séparation
00:28:24 va être très court.
00:28:25 D'accord ?
00:28:26 Par contre,
00:28:27 celui de l'acide aminé
00:28:28 ou de l'échantillon
00:28:29 chimique,
00:28:30 il est moins soluble
00:28:31 avec la solubilité
00:28:32 de la phase mobile
00:28:33 et quoi ?
00:28:34 Il va être
00:28:35 plus soluble.
00:28:36 C'est logique.
00:28:37 Il va être plus soluble
00:28:38 et plus rapide.
00:28:39 Il va être plus rapide
00:28:40 pour sortir
00:28:41 de la colonne.
00:28:42 D'accord ?
00:28:43 Donc ici,
00:28:44 je peux te dire
00:28:45 que ce composé rouge,
00:28:46 c'est très soluble
00:28:47 avec la solubilité
00:28:48 que j'ai utilisé.
00:28:49 Par contre,
00:28:50 ce composé bleu,
00:28:51 clair,
00:28:52 vert,
00:28:53 je ne sais pas,
00:28:54 je ne connais pas
00:28:55 de la couleur,
00:28:56 je ne sais jamais
00:28:57 ce qui est important.
00:28:58 Ce composé,
00:28:59 c'est très peu soluble
00:29:00 parce qu'il prend
00:29:01 plus de 50 m,
00:29:02 mais il ne sort pas.
00:29:03 Il est très peu soluble
00:29:04 avec la solubilité.
00:29:05 D'accord ?
00:29:06 Donc,
00:29:07 on va dire
00:29:08 que c'est super.
00:29:09 On réussit du coup
00:29:10 à différencier
00:29:11 les acides aminés
00:29:12 entre eux,
00:29:13 les échantillons
00:29:14 théoriques
00:29:15 entre eux.
00:29:16 Super !
00:29:17 Quand ils se déplacent,
00:29:18 est-ce qu'on va les récupérer ?
00:29:19 Oui,
00:29:20 on va les récupérer.
00:29:21 Oui,
00:29:22 on va les récupérer
00:29:23 des aiglures.
00:29:24 Ok,
00:29:25 donc comment on sait
00:29:26 quel acide aminé,
00:29:27 quel échantillon,
00:29:28 quel composé
00:29:29 sort de la colonne ?
00:29:30 Comment on sait ?
00:29:31 Et maintenant,
00:29:32 on va utiliser
00:29:33 une autre propriété
00:29:34 des acides aminés.
00:29:35 Une propriété physique
00:29:37 qui est la propriété spectrale
00:29:39 des acides aminés.
00:29:40 Les acides aminés,
00:29:41 ils absorbent,
00:29:42 ils absorbent dans l'UV.
00:29:44 Ils absorbent dans l'UV.
00:29:46 Donc,
00:29:47 on va avoir un détecteur
00:29:49 qui est un spectrophotomètre
00:29:51 que l'on met
00:29:53 dans le terminus,
00:29:54 je ne sais pas si ça peut se dire,
00:29:56 mais dans le terminus,
00:29:57 dans la fin de la colonne.
00:29:58 A chaque fois qu'il sort
00:29:59 un acide aminé,
00:30:00 il va sortir
00:30:01 un spectrophotomètre
00:30:02 qui va sortir
00:30:03 et qui va enregistrer le temps.
00:30:05 Le temps qu'a pris
00:30:06 ce composé pour sortir.
00:30:08 Ensuite,
00:30:09 ce détecteur va le bombarder
00:30:11 dans l'UV.
00:30:12 Il va bombarder dans l'UV,
00:30:13 il va voir le taux d'absorbance,
00:30:15 il va calculer
00:30:16 le taux d'absorbance.
00:30:18 Et chaque acide aminé,
00:30:19 chaque élément chimique
00:30:20 a un taux d'absorbance.
00:30:21 Donc,
00:30:22 ce détecteur va donner un graphe
00:30:23 qui est un chromatographe.
00:30:25 Ce graphe,
00:30:26 il va calculer
00:30:27 le taux d'absorbance
00:30:28 de chaque acide aminé.
00:30:29 Et chaque acide aminé,
00:30:30 chaque élément chimique
00:30:31 a un taux d'absorbance.
00:30:32 Ce chromatographe,
00:30:34 il va faire quoi ?
00:30:36 Il va donner le temps
00:30:37 que l'acide aminé a pris
00:30:38 pour sortir
00:30:39 ce composé
00:30:40 et il va donner le taux d'absorbance.
00:30:41 Comme ça,
00:30:42 je vais pouvoir savoir
00:30:43 chaque élément chimique
00:30:44 qui est dans ce spectrophotomètre.
00:30:47 Et je vais pouvoir
00:30:48 connaître son taux d'absorbance.
00:30:50 D'accord ?
00:30:51 Le temps qu'il a pris
00:30:52 pour sortir
00:30:53 avec son taux d'absorbance,
00:30:54 ça va permettre d'identifier,
00:30:55 de connaître
00:30:56 les éléments chimiques
00:30:57 qui sont dans ce spectrophotomètre.
00:30:59 Les éléments chimiques,
00:31:00 en pluriel,
00:31:01 sont dans ce spectrophotomètre.
00:31:03 D'accord ?
00:31:04 Ensuite,
00:31:05 en plus de ça,
00:31:06 c'est une autre chose,
00:31:07 c'est de suivre les mémoires.
00:31:08 En plus de savoir,
00:31:09 de pouvoir se séparer
00:31:10 et d'identifier
00:31:11 les acides aminés
00:31:12 ou les éléments chimiques,
00:31:13 on doit savoir
00:31:14 le volume de ces éléments.
00:31:15 Quel est le volume
00:31:16 des éléments chimiques
00:31:17 dans ce spectrophotomètre ?
00:31:18 Est-ce qu'il y en a
00:31:19 beaucoup ou pas ?
00:31:20 L'élément A,
00:31:21 est-ce qu'il y a plus
00:31:22 d'éléments B
00:31:23 dans ce spectrophotomètre
00:31:24 ou l'inverse ?
00:31:25 Est-ce que l'élément B
00:31:26 a plus d'éléments A ?
00:31:27 Du coup,
00:31:28 je peux calculer
00:31:29 le volume
00:31:30 d'élucidation,
00:31:31 le volume
00:31:32 de ce composé.
00:31:33 Le composé chimique
00:31:34 d'acides aminés
00:31:35 est-il suffisant
00:31:36 pour les échantillons ?
00:31:37 Est-ce qu'il y en a pas ?
00:31:38 Ce chromatogramme,
00:31:39 les gens,
00:31:40 ce chromatogramme,
00:31:41 qui est-il bien ?
00:31:42 Ici, j'ai un volume.
00:31:43 Ici, ce sont des pics.
00:31:44 Ce sont des pics
00:31:45 de l'absorbance
00:31:46 de mes composés chimiques,
00:31:47 les pics d'absorbance.
00:31:48 Et tu remarques bien,
00:31:49 regarde ce pic,
00:31:50 compare ce pic
00:31:51 à celui de gauche
00:31:52 ou à celui de droite,
00:31:53 et tu vois
00:31:54 que c'est un pic
00:31:55 de l'absorbance
00:31:56 de mes composés chimiques.
00:31:57 Et tu vois
00:31:58 que c'est un pic
00:31:59 de gauche
00:32:00 ou un pic de droite.
00:32:01 Bon,
00:32:02 là, c'est une trottinette,
00:32:03 les gens.
00:32:04 Compare le pic de gauche
00:32:05 et le pic de droite.
00:32:06 Qu'est-ce que tu remarques ?
00:32:07 Ne te dis pas
00:32:08 que c'est un pic de droite
00:32:09 et un pic de gauche
00:32:10 parce que ça,
00:32:11 c'est le taux d'absorbance.
00:32:12 C'est normal,
00:32:13 vu que les composés
00:32:14 sont différents,
00:32:15 ils n'ont pas
00:32:16 le même taux d'absorbance.
00:32:17 Qu'est-ce que tu remarques ?
00:32:18 C'est un pic de gauche
00:32:19 et un pic de droite.
00:32:20 C'est un pic de gauche
00:32:21 et un pic de droite.
00:32:22 Ça veut dire quoi ?
00:32:23 C'est un pic de gauche
00:32:24 et un pic de droite.
00:32:25 Et tu vois,
00:32:26 à la base,
00:32:27 il a pris
00:32:28 cet élément,
00:32:29 il a pris
00:32:30 plus de temps
00:32:31 que cet élément
00:32:32 qui est le pic
00:32:33 de gauche.
00:32:34 Si on le regarde,
00:32:35 ça veut dire
00:32:36 que ça a pris
00:32:37 beaucoup de temps,
00:32:38 entre 5 minutes
00:32:39 et un mois.
00:32:40 Il a pris 5 minutes
00:32:41 pour qu'il sort
00:32:42 ce pic,
00:32:43 ce chimique,
00:32:44 c'est-à-dire
00:32:45 10 minutes.
00:32:46 Il a pris 5 minutes
00:32:47 pour qu'il sort
00:32:48 ce pic A.
00:32:49 Par contre,
00:32:50 ce pic,
00:32:51 ce pic A,
00:32:52 c'est un élément
00:32:53 qui est plus petit.
00:32:54 C'est un pic A,
00:32:55 c'est un pic A.
00:32:56 C'est un pic A,
00:32:57 c'est un pic A.
00:32:58 C'est un pic A,
00:32:59 c'est un pic A.
00:33:00 C'est un pic A,
00:33:01 c'est un pic A.
00:33:02 C'est un pic A,
00:33:03 c'est un pic A.
00:33:04 C'est un pic A,
00:33:05 c'est un pic A.
00:33:06 C'est un pic A,
00:33:07 c'est un pic A.
00:33:08 C'est un pic A,
00:33:09 c'est un pic A.
00:33:10 C'est un pic A,
00:33:11 c'est un pic A.
00:33:12 C'est un pic A,
00:33:13 c'est un pic A.
00:33:14 C'est un pic A,
00:33:15 c'est un pic A.
00:33:16 C'est un pic A,
00:33:17 c'est un pic A.
00:33:23 C'est un pic A,
00:33:24 c'est un pic A.
00:33:25 C'est un pic A,
00:33:26 c'est un pic A.
00:33:27 C'est un pic A,
00:33:28 c'est un pic A.
00:33:29 C'est un pic A,
00:33:30 c'est un pic A.
00:33:31 C'est un pic A,
00:33:32 c'est un pic A.
00:33:33 C'est un pic A,
00:33:34 c'est un pic A.
00:33:35 C'est un pic A,
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00:35:31 c'est un pic A.
00:35:32 C'est un pic A,
00:35:33 c'est un pic A.
00:35:34 C'est un pic A,
00:35:35 c'est un pic A.
00:35:36 C'est un pic A,
00:35:37 c'est un pic A.
00:35:38 C'est un pic A,
00:35:39 c'est un pic A.
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00:35:41 c'est un pic A.
00:35:42 C'est un pic A,
00:35:43 c'est un pic A.
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00:35:45 c'est un pic A.
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00:36:02 c'est un pic A.
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00:36:26 c'est un pic A.
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00:36:30 c'est un pic A.
00:36:31 C'est un pic A,
00:36:32 c'est un pic A.
00:36:33 C'est un pic A,
00:36:34 c'est un pic A.
00:36:35 C'est un pic A,
00:36:36 c'est un pic A.
00:36:37 C'est un pic A,
00:36:38 c'est un pic A.
00:36:39 C'est un pic A,
00:36:40 c'est un pic A.
00:36:41 C'est un pic A,
00:36:42 c'est un pic A.
00:36:43 C'est un pic A,
00:36:44 c'est un pic A.
00:36:45 C'est un pic A,
00:36:46 c'est un pic A.
00:36:47 C'est un pic A,
00:36:48 c'est un pic A.
00:36:49 C'est un pic A,
00:36:55 c'est un pic A.
00:36:56 C'est un pic A,
00:36:57 c'est un pic A.
00:36:58 C'est un pic A,
00:36:59 c'est un pic A.
00:37:00 C'est un pic A,
00:37:01 c'est un pic A.
00:37:02 C'est un pic A,
00:37:03 c'est un pic A.
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00:37:05 c'est un pic A.
00:37:06 C'est un pic A,
00:37:07 c'est un pic A.
00:37:08 C'est un pic A,
00:37:09 c'est un pic A.
00:37:10 C'est un pic A,
00:37:11 c'est un pic A.
00:37:12 C'est un pic A,
00:37:13 c'est un pic A.
00:37:14 C'est un pic A,
00:37:15 c'est un pic A.
00:37:16 C'est un pic A,
00:37:17 c'est un pic A.
00:37:18 C'est un pic A,
00:37:19 c'est un pic A.
00:37:20 C'est un pic A,
00:37:21 c'est un pic A.
00:37:22 C'est un pic A,
00:37:23 c'est un pic A.
00:37:24 C'est un pic A,
00:37:25 c'est un pic A.
00:37:26 C'est un pic A,
00:37:27 c'est un pic A.
00:37:28 C'est un pic A,
00:37:29 c'est un pic A.
00:37:30 C'est un pic A,
00:37:31 c'est un pic A.
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00:37:33 c'est un pic A.
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00:37:35 c'est un pic A.
00:37:36 C'est un pic A,
00:37:37 c'est un pic A.
00:37:38 C'est un pic A,
00:37:39 c'est un pic A.
00:37:40 C'est un pic A,
00:37:41 c'est un pic A.
00:37:42 C'est un pic A,
00:37:48 c'est un pic A.
00:37:49 C'est un pic A,
00:37:50 c'est un pic A.
00:37:51 C'est un pic A,
00:37:52 c'est un pic A.
00:37:53 C'est un pic A,
00:37:54 c'est un pic A.
00:37:55 C'est un pic A,
00:37:56 c'est un pic A.
00:37:57 C'est un pic A,
00:37:58 c'est un pic A.
00:37:59 C'est un pic A,
00:38:00 c'est un pic A.
00:38:01 C'est un pic A,
00:38:02 c'est un pic A.
00:38:03 C'est un pic A,
00:38:04 c'est un pic A.
00:38:05 C'est un pic A,
00:38:06 c'est un pic A.
00:38:07 C'est un pic A,
00:38:08 c'est un pic A.
00:38:09 C'est un pic A,
00:38:10 c'est un pic A.
00:38:11 C'est un pic A,
00:38:12 c'est un pic A.
00:38:13 C'est un pic A,
00:38:14 c'est un pic A.
00:38:15 C'est un pic A,
00:38:16 c'est un pic A.
00:38:17 C'est un pic A,
00:38:18 c'est un pic A.
00:38:19 C'est un pic A,
00:38:20 c'est un pic A.
00:38:21 C'est un pic A,
00:38:22 c'est un pic A.
00:38:23 C'est un pic A,
00:38:24 c'est un pic A.
00:38:25 C'est un pic A,
00:38:26 c'est un pic A.
00:38:27 C'est un pic A,
00:38:28 c'est un pic A.
00:38:29 C'est un pic A,
00:38:30 c'est un pic A.
00:38:31 C'est un pic A,
00:38:32 c'est un pic A.
00:38:33 C'est un pic A,
00:38:34 c'est un pic A.
00:38:35 C'est un pic A,
00:38:41 c'est un pic A.
00:38:42 C'est un pic A,
00:38:43 c'est un pic A.
00:38:44 C'est un pic A,
00:38:45 c'est un pic A.
00:38:46 C'est un pic A,
00:38:47 c'est un pic A.
00:38:48 C'est un pic A,
00:38:49 c'est un pic A.
00:38:50 C'est un pic A,
00:38:51 c'est un pic A.
00:38:52 C'est un pic A,
00:38:53 c'est un pic A.
00:38:54 C'est un pic A,
00:38:55 c'est un pic A.
00:38:56 C'est un pic A,
00:38:57 c'est un pic A.
00:38:58 C'est un pic A,
00:38:59 c'est un pic A.
00:39:00 C'est un pic A,
00:39:01 c'est un pic A.
00:39:02 C'est un pic A,
00:39:03 c'est un pic A.
00:39:04 C'est un pic A,
00:39:05 c'est un pic A.
00:39:06 C'est un pic A,
00:39:07 c'est un pic A.
00:39:08 C'est un pic A,
00:39:09 c'est un pic A.
00:39:10 C'est un pic A,
00:39:11 c'est un pic A.
00:39:12 C'est un pic A,
00:39:13 c'est un pic A.
00:39:14 C'est un pic A,
00:39:15 c'est un pic A.
00:39:16 C'est un pic A,
00:39:17 c'est un pic A.
00:39:18 C'est un pic A,
00:39:19 c'est un pic A.
00:39:20 C'est un pic A,
00:39:21 c'est un pic A.
00:39:22 C'est un pic A,
00:39:23 c'est un pic A.
00:39:24 C'est un pic A,
00:39:25 c'est un pic A.
00:39:26 C'est un pic A,
00:39:27 c'est un pic A.
00:39:28 C'est un pic A,
00:39:34 c'est un pic A.
00:39:35 C'est un pic A,
00:39:36 c'est un pic A.
00:39:37 C'est un pic A,
00:39:38 c'est un pic A.
00:39:39 C'est un pic A,
00:39:40 c'est un pic A.
00:39:41 C'est un pic A,
00:39:42 c'est un pic A.
00:39:43 C'est un pic A,
00:39:44 c'est un pic A.
00:39:45 C'est un pic A,
00:39:46 c'est un pic A.
00:39:47 C'est un pic A,
00:39:48 c'est un pic A.
00:39:49 C'est un pic A,
00:39:50 c'est un pic A.
00:39:51 C'est un pic A,
00:39:52 c'est un pic A.
00:39:53 C'est un pic A,
00:39:54 c'est un pic A.
00:39:55 C'est un pic A,
00:39:56 c'est un pic A.
00:39:57 Donc autant de faux-cas,
00:39:58 on va garder plus la distance
00:39:59 qu'on a en cas de la distance
00:40:00 parce que du coup,
00:40:01 on s'en foutait de l'autre.
00:40:02 On s'en foutait du coup de la vitesse,
00:40:03 du déplacement.
00:40:04 C'était beaucoup plus la distance
00:40:05 mais en la fin,
00:40:06 c'est ce qu'ils vont nous donner.
00:40:07 La chromatographie sur papier
00:40:08 et sur couche mince,
00:40:09 la CCM.
00:40:10 Ici,
00:40:11 vu que c'est une colonne,
00:40:12 il y a un colonne,
00:40:13 donc il n'y a pas une distance
00:40:14 en cas de la distance.
00:40:15 Par contre,
00:40:16 en cas de la distance,
00:40:17 le temps et la vitesse
00:40:18 parce qu'ils sont liés.
00:40:19 D'accord ?
00:40:20 Le temps et la vitesse.
00:40:21 OK ?
00:40:22 À leur sortie,
00:40:23 évidemment,
00:40:24 vous avez un détecteur.
00:40:25 Un détecteur qui va faire quoi ?
00:40:26 Qui va recorder,
00:40:27 qui va enregistrer
00:40:28 où est-ce qu'il est sorti,
00:40:29 quel composé est sorti,
00:40:30 avec cet échantillon.
00:40:31 D'accord ?
00:40:32 C'est ça la chromatographie
00:40:33 en face gazeuse.
00:40:34 Mais il y a encore
00:40:35 des choses.
00:40:36 Bon,
00:40:37 ils sont liés dans la 1,
00:40:38 parce que c'est dans la 1.
00:40:39 C'est dans la 1,
00:40:40 il y a beaucoup d'éléments.
00:40:41 Je vais vous en parler
00:40:42 et vous allez comprendre.
00:40:43 La HPLC.
00:40:44 Vous avez vu la HPLC ?
00:40:45 Vous avez vu
00:40:46 que je vous ai parlé
00:40:47 de la chromatographie
00:40:48 en face gazeuse.
00:40:49 C'est la 1.
00:40:50 Vous avez vu la HPLC ?
00:40:51 Vous avez vu que je vous ai parlé
00:40:52 de la chromatographie
00:40:53 sur colonne.
00:40:54 C'est la copie et le coller.
00:40:55 C'est la copie et le coller.
00:40:56 C'est la même chose.
00:40:57 La HPLC,
00:40:58 c'est une chromatographie liquide
00:40:59 sur colonne
00:41:00 avec une haute performance.
00:41:01 Avec une haute performance,
00:41:02 on a une haute pression
00:41:03 quand on sort.
00:41:04 C'est ça la différence.
00:41:05 Vous avez vu ?
00:41:06 Vous avez vu
00:41:07 que c'est très simple à apprendre ?
00:41:08 Je vais vous montrer le schéma.
00:41:09 C'est exactement le même
00:41:10 que la moque-bêlette.
00:41:11 La seule différence,
00:41:12 c'est que la colonne,
00:41:13 la HPLC,
00:41:14 c'est la colonne.
00:41:15 C'est une colonne spéciale.
00:41:16 Cette colonne spéciale,
00:41:17 elle a des petits grains,
00:41:18 des petits grains de petite taille
00:41:19 que nous allons représenter
00:41:20 comme étant la face stationnaire.
00:41:21 La face stationnaire,
00:41:22 c'est quoi ?
00:41:23 C'est ce qui est derrière
00:41:24 la colonne.
00:41:25 Ce sont des petits grains.
00:41:26 Je ne sais pas si vous savez
00:41:27 les détails.
00:41:28 En tout cas,
00:41:29 ce sont des petits grains
00:41:30 qui vont permettre
00:41:31 de bien différencier,
00:41:32 de se faire séparer
00:41:33 ou de se faire séparer
00:41:34 de la colonne.
00:41:35 C'est ça la différence.
00:41:36 C'est la colonne spéciale.
00:41:37 C'est la colonne spéciale.
00:41:38 C'est la colonne spéciale.
00:41:39 C'est la colonne spéciale.
00:41:40 C'est la colonne spéciale.
00:41:41 Donc, on va pouvoir se séparer
00:41:45 ou se séparer
00:41:46 les composés,
00:41:47 les constituants de la colonne.
00:41:48 D'accord ?
00:41:49 La phase mobile,
00:41:50 c'est un solvant.
00:41:51 Donc, vous le savez.
00:41:52 La seule différence,
00:41:53 c'est que la pompe,
00:41:54 regardez la pompe
00:41:55 qui est en dessous.
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01:07:44 C'est la pompe
01:07:45 qui va propulser
01:07:46 le liquide.
01:07:47 Et vu que le
01:07:48 le parti
01:07:49 le parti
01:07:50 entre le pH
01:07:51 et le pH
01:07:52 est très grand
01:07:53 la distance
01:07:54 entre les 2
01:07:55 est très grande.
01:07:56 Regardez
01:07:57 comment ça a disparu.
01:07:58 Ici,
01:07:59 il y a une erreur
01:08:00 avec l'aniline et l'acide aspartic.
01:08:01 Reversez-le entre vous.
01:08:02 Reversez-le ici
01:08:03 dans le champ
01:08:04 entre l'aniline et l'acide aspartic.
01:08:05 C'est une erreur,
01:08:06 les gens.
01:08:07 Normalement,
01:08:08 c'est l'aniline
01:08:09 qui est en bleu
01:08:10 qui a disparu
01:08:11 plus que l'acide aspartic.
01:08:12 qui a disparu
01:08:13 plus que l'acide aspartic.
01:08:14 C'est l'aniline
01:08:15 qui est en bleu
01:08:16 qui a disparu
01:08:17 plus que l'acide aspartic.
01:08:18 Vous allez me dire
01:08:19 pourquoi c'est pareil.
01:08:20 Parce que
01:08:21 la différence
01:08:22 entre le pH
01:08:23 de l'aniline
01:08:24 et le pH
01:08:25 de l'aniline
01:08:26 est plus grande
01:08:27 que la différence
01:08:28 entre le pH
01:08:29 de l'aniline
01:08:30 et le pH
01:08:31 de l'acide aspartic.
01:08:32 de l'acide aspartic.
01:08:33 Et je vous ai dit
01:08:34 que la base,
01:08:35 prenez-la.
01:08:36 Vous l'avez vu
01:08:37 dans le terminal.
01:08:38 Et vous avez fait
01:08:39 comme ça
01:08:40 dans la première étape.
01:08:41 Par contre,
01:08:42 la différence
01:08:43 entre le pH
01:08:44 le pH
01:08:45 de l'aniline
01:08:46 est plus grande
01:08:47 que la différence
01:08:48 entre le pH
01:08:49 de l'acide aspartic.
01:08:50 Si le pH
01:08:51 si le pH
01:08:52 était plus petit
01:08:53 que
01:08:54 le pH
01:08:55 de l'aniline
01:08:56 de l'acide aspartic
01:08:57 et qu'est-ce qui s'est passé ?
01:08:58 Si le pH
01:08:59 était plus petit
01:09:00 que le pH
01:09:01 de l'aniline
01:09:02 de l'acide aspartic
01:09:03 et qu'est-ce qui s'est passé ?
01:09:04 Entre les 3,
01:09:05 ils ont chargé
01:09:06 comment ?
01:09:07 Ils ont chargé
01:09:08 en mode positif.
01:09:09 Vous me direz
01:09:10 pourquoi ils ont chargé
01:09:11 en mode positif.
01:09:12 Je vous expliquerai.
01:09:13 Parce que le pH
01:09:14 est plus petit
01:09:15 que le pH
01:09:16 de l'aniline d'acide aspartic.
01:09:17 Nous considérons
01:09:18 que le pH
01:09:19 de l'aniline d'acide aspartic
01:09:20 est plus petit
01:09:21 que le pH
01:09:22 de l'aniline d'acide aspartic.
01:09:23 Qu'est-ce qui s'est passé ?
01:09:24 Ils ont chargé
01:09:25 sur le cadre.
01:09:26 Et qu'est-ce qui s'est passé
01:09:27 sur le cadre ?
01:09:28 Comment est-ce qu'il a été chargé ?
01:09:29 Il y a un H2
01:09:30 et un H3+.
01:09:31 Et quand il est plus petit,
01:09:32 il est chargé
01:09:33 comment ?
01:09:34 Il est chargé
01:09:35 en mode positif.
01:09:36 Il a été chargé
01:09:37 vers le pôle négatif
01:09:38 qui est le cathode.
01:09:39 C'est pareil
01:09:40 pour le pôle négatif.
01:09:41 Il est chargé
01:09:42 vers le pôle négatif.
01:09:43 Il est chargé
01:09:44 vers le pôle négatif.
01:09:45 Il est chargé
01:09:46 vers le pôle négatif.
01:09:47 Il est chargé
01:09:48 vers le pôle négatif.
01:09:49 Il est chargé
01:09:50 vers le pôle négatif.
01:09:51 Il est chargé
01:09:52 vers le pôle négatif.
01:09:53 Il est chargé
01:09:54 vers le pôle négatif.
01:09:55 Il est chargé
01:09:56 vers le pôle négatif.
01:09:57 Il est chargé
01:09:58 vers le pôle négatif.
01:09:59 Il est chargé
01:10:00 vers le pôle négatif.
01:10:01 Il est chargé
01:10:02 vers le pôle négatif.
01:10:03 Il est chargé
01:10:04 vers le pôle négatif.
01:10:05 Il est chargé
01:10:10 vers le pôle négatif.
01:10:11 Il est chargé
01:10:12 vers le pôle négatif.
01:10:13 Il est chargé
01:10:14 vers le pôle négatif.
01:10:15 Il est chargé
01:10:16 vers le pôle négatif.
01:10:17 Il est chargé
01:10:18 vers le pôle négatif.
01:10:19 Il est chargé
01:10:20 vers le pôle négatif.
01:10:21 Il est chargé
01:10:22 vers le pôle négatif.
01:10:23 Il est chargé
01:10:24 vers le pôle négatif.
01:10:25 Il est chargé
01:10:26 vers le pôle négatif.
01:10:27 Il est chargé
01:10:28 vers le pôle négatif.
01:10:29 Il est chargé
01:10:30 vers le pôle négatif.
01:10:31 Il est chargé
01:10:32 vers le pôle négatif.
01:10:33 Il est chargé
01:10:34 vers le pôle négatif.
01:10:35 Il est chargé
01:10:36 vers le pôle négatif.
01:10:37 Il est chargé
01:10:38 vers le pôle négatif.
01:10:39 Il est chargé
01:10:40 vers le pôle négatif.
01:10:41 Il est chargé
01:10:42 vers le pôle négatif.
01:10:43 Il est chargé
01:10:44 vers le pôle négatif.
01:10:45 Il est chargé
01:10:46 vers le pôle négatif.
01:10:47 Il est chargé
01:10:48 vers le pôle négatif.
01:10:49 Il est chargé
01:10:50 vers le pôle négatif.
01:10:51 Il est chargé
01:10:52 vers le pôle négatif.
01:10:53 Il est chargé
01:10:54 vers le pôle négatif.
01:10:55 Il est chargé
01:10:56 vers le pôle négatif.
01:10:57 Il est chargé
01:10:58 vers le pôle négatif.
01:10:59 Il est chargé
01:11:04 vers le pôle négatif.
01:11:05 Il est chargé
01:11:06 vers le pôle négatif.
01:11:07 Il est chargé
01:11:08 vers le pôle négatif.
01:11:09 Il est chargé
01:11:10 vers le pôle négatif.
01:11:11 Il est chargé
01:11:12 vers le pôle négatif.
01:11:13 Il est chargé
01:11:14 vers le pôle négatif.
01:11:15 Il est chargé
01:11:16 vers le pôle négatif.
01:11:17 Il est chargé
01:11:18 vers le pôle négatif.
01:11:19 Il est chargé
01:11:20 vers le pôle négatif.
01:11:21 Il est chargé
01:11:22 vers le pôle négatif.
01:11:23 Il est chargé
01:11:24 vers le pôle négatif.
01:11:25 Il est chargé
01:11:26 vers le pôle négatif.
01:11:27 Il est chargé
01:11:28 vers le pôle négatif.
01:11:29 Il est chargé
01:11:30 vers le pôle négatif.
01:11:31 Il est chargé
01:11:32 vers le pôle négatif.
01:11:33 Il est chargé
01:11:34 vers le pôle négatif.
01:11:35 Il est chargé
01:11:36 vers le pôle négatif.
01:11:37 Il est chargé
01:11:38 vers le pôle négatif.
01:11:39 Il est chargé
01:11:40 vers le pôle négatif.
01:11:41 Il est chargé
01:11:42 vers le pôle négatif.
01:11:43 Il est chargé
01:11:44 vers le pôle négatif.
01:11:45 Il est chargé
01:11:46 vers le pôle négatif.
01:11:47 Il est chargé
01:11:48 vers le pôle négatif.
01:11:49 Il est chargé
01:11:50 vers le pôle négatif.
01:11:51 Il est chargé
01:11:52 vers le pôle négatif.
01:11:53 Il est chargé
01:11:58 vers le pôle négatif.
01:11:59 Il est chargé
01:12:00 vers le pôle négatif.
01:12:01 Il est chargé
01:12:02 vers le pôle négatif.
01:12:03 Il est chargé
01:12:04 vers le pôle négatif.
01:12:05 Il est chargé
01:12:06 vers le pôle négatif.
01:12:07 Il est chargé
01:12:08 vers le pôle négatif.
01:12:09 Il est chargé
01:12:10 vers le pôle négatif.
01:12:11 Il est chargé
01:12:12 vers le pôle négatif.
01:12:13 Il est chargé
01:12:14 vers le pôle négatif.
01:12:15 Il est chargé
01:12:16 vers le pôle négatif.
01:12:17 Il est chargé
01:12:18 vers le pôle négatif.
01:12:19 Il est chargé
01:12:20 vers le pôle négatif.
01:12:21 Il est chargé
01:12:22 vers le pôle négatif.
01:12:23 Il est chargé
01:12:24 vers le pôle négatif.
01:12:25 Il est chargé
01:12:26 vers le pôle négatif.
01:12:27 Il est chargé
01:12:28 vers le pôle négatif.
01:12:29 Il est chargé
01:12:30 vers le pôle négatif.
01:12:31 Il est chargé
01:12:32 vers le pôle négatif.
01:12:33 Il est chargé
01:12:34 vers le pôle négatif.
01:12:35 Il est chargé
01:12:36 vers le pôle négatif.
01:12:37 Il est chargé
01:12:38 vers le pôle négatif.
01:12:39 Il est chargé
01:12:40 vers le pôle négatif.
01:12:41 Il est chargé
01:12:42 vers le pôle négatif.
01:12:43 Il est chargé
01:12:44 vers le pôle négatif.
01:12:45 Il est chargé
01:12:46 vers le pôle négatif.
01:12:47 Il est chargé
01:12:52 vers le pôle négatif.
01:12:53 Il est chargé
01:12:54 vers le pôle négatif.
01:12:55 Il est chargé
01:12:56 vers le pôle négatif.
01:12:57 Il est chargé
01:12:58 vers le pôle négatif.
01:12:59 Il est chargé
01:13:00 vers le pôle négatif.
01:13:01 Il est chargé
01:13:02 vers le pôle négatif.
01:13:03 Il est chargé
01:13:04 vers le pôle négatif.
01:13:05 Il est chargé
01:13:06 vers le pôle négatif.
01:13:07 Il est chargé
01:13:08 vers le pôle négatif.
01:13:09 Il est chargé
01:13:10 vers le pôle négatif.
01:13:11 Il est chargé
01:13:12 vers le pôle négatif.
01:13:13 Il est chargé
01:13:14 vers le pôle négatif.
01:13:15 Il est chargé
01:13:16 vers le pôle négatif.
01:13:17 Il est chargé
01:13:18 vers le pôle négatif.
01:13:19 Il est chargé
01:13:20 vers le pôle négatif.
01:13:21 Il est chargé
01:13:22 vers le pôle négatif.
01:13:23 Il est chargé
01:13:24 vers le pôle négatif.
01:13:25 Il est chargé
01:13:26 vers le pôle négatif.
01:13:27 Il est chargé
01:13:28 vers le pôle négatif.
01:13:29 Il est chargé
01:13:30 vers le pôle négatif.
01:13:31 Il est chargé
01:13:32 vers le pôle négatif.
01:13:33 Il est chargé
01:13:34 vers le pôle négatif.
01:13:35 Il est chargé
01:13:36 vers le pôle négatif.
01:13:37 Il est chargé
01:13:38 vers le pôle négatif.
01:13:39 Il est chargé
01:13:40 vers le pôle négatif.
01:13:41 Il est chargé
01:13:46 vers le pôle négatif.
01:13:47 Il est chargé
01:13:48 vers le pôle négatif.
01:13:49 Il est chargé
01:13:50 vers le pôle négatif.
01:13:51 Il est chargé
01:13:52 vers le pôle négatif.
01:13:53 Il est chargé
01:13:54 vers le pôle négatif.
01:13:55 Il est chargé
01:13:56 vers le pôle négatif.
01:13:57 Il est chargé
01:13:58 vers le pôle négatif.
01:13:59 Il est chargé
01:14:00 vers le pôle négatif.
01:14:01 Il est chargé
01:14:02 vers le pôle négatif.
01:14:03 Il est chargé
01:14:04 vers le pôle négatif.
01:14:05 Il est chargé
01:14:06 vers le pôle négatif.
01:14:07 Il est chargé
01:14:08 vers le pôle négatif.
01:14:09 Il est chargé
01:14:10 vers le pôle négatif.
01:14:11 Il est chargé
01:14:12 vers le pôle négatif.
01:14:13 Il est chargé
01:14:14 vers le pôle négatif.
01:14:15 Il est chargé
01:14:16 vers le pôle négatif.
01:14:17 Il est chargé
01:14:18 vers le pôle négatif.
01:14:19 Il est chargé
01:14:20 vers le pôle négatif.
01:14:21 Il est chargé
01:14:22 vers le pôle négatif.
01:14:23 Il est chargé
01:14:24 vers le pôle négatif.
01:14:25 Il est chargé
01:14:26 vers le pôle négatif.
01:14:27 Il est chargé
01:14:28 vers le pôle négatif.
01:14:29 Il est chargé
01:14:30 vers le pôle négatif.
01:14:31 Il est chargé
01:14:32 vers le pôle négatif.
01:14:33 Il est chargé
01:14:34 vers le pôle négatif.
01:14:35 Il est chargé
01:14:40 vers le pôle négatif.
01:14:41 Il est chargé
01:14:42 vers le pôle négatif.
01:14:43 Il est chargé
01:14:44 vers le pôle négatif.
01:14:45 Il est chargé
01:14:46 vers le pôle négatif.
01:14:47 Il est chargé
01:14:48 vers le pôle négatif.
01:14:49 Il est chargé
01:14:50 vers le pôle négatif.
01:14:51 Il est chargé
01:14:52 vers le pôle négatif.
01:14:53 Il est chargé
01:14:54 vers le pôle négatif.
01:14:55 Il est chargé
01:14:56 vers le pôle négatif.
01:14:57 Il est chargé
01:14:58 vers le pôle négatif.
01:14:59 Il est chargé
01:15:00 vers le pôle négatif.
01:15:01 Il est chargé
01:15:02 vers le pôle négatif.
01:15:03 Il est chargé
01:15:04 vers le pôle négatif.
01:15:05 Il est chargé
01:15:06 vers le pôle négatif.
01:15:07 Il est chargé
01:15:08 vers le pôle négatif.
01:15:09 Il est chargé
01:15:10 vers le pôle négatif.
01:15:11 Il est chargé
01:15:12 vers le pôle négatif.
01:15:13 Il est chargé
01:15:14 vers le pôle négatif.
01:15:15 Il est chargé
01:15:16 vers le pôle négatif.
01:15:17 Il est chargé
01:15:18 vers le pôle négatif.
01:15:19 Il est chargé
01:15:20 vers le pôle négatif.
01:15:21 Il est chargé
01:15:22 vers le pôle négatif.
01:15:23 Il est chargé
01:15:24 vers le pôle négatif.
01:15:25 Il est chargé
01:15:26 vers le pôle négatif.
01:15:27 Il est chargé
01:15:28 vers le pôle négatif.
01:15:29 Il est chargé
01:15:30 vers le pôle négatif.
01:15:31 Il est chargé
01:15:32 vers le pôle négatif.
01:15:33 Il est chargé
01:15:34 vers le pôle négatif.
01:15:35 Il est chargé
01:15:36 vers le pôle négatif.
01:15:37 Il est chargé
01:15:38 vers le pôle négatif.
01:15:39 Il est chargé
01:15:40 vers le pôle négatif.
01:15:41 Il est chargé
01:15:42 vers le pôle négatif.
01:15:43 Il est chargé
01:15:44 vers le pôle négatif.
01:15:45 Il est chargé
01:15:46 vers le pôle négatif.
01:15:47 Il est chargé
01:15:48 vers le pôle négatif.
01:15:49 Il est chargé
01:15:50 vers le pôle négatif.
01:15:51 Il est chargé
01:15:52 vers le pôle négatif.
01:15:53 Il est chargé
01:15:54 vers le pôle négatif.
01:16:00 Il est chargé
01:16:01 vers le pôle négatif.
01:16:02 Il est chargé
01:16:03 vers le pôle négatif.
01:16:04 Il est chargé
01:16:05 vers le pôle négatif.
01:16:06 Il est chargé
01:16:07 vers le pôle négatif.
01:16:08 Il est chargé
01:16:09 vers le pôle négatif.
01:16:10 Il est chargé
01:16:11 vers le pôle négatif.
01:16:12 Il est chargé
01:16:13 vers le pôle négatif.
01:16:14 Il est chargé
01:16:15 vers le pôle négatif.
01:16:16 Il est chargé
01:16:17 vers le pôle négatif.
01:16:18 Il est chargé
01:16:19 vers le pôle négatif.
01:16:20 Il est chargé
01:16:21 vers le pôle négatif.
01:16:22 Il est chargé
01:16:23 vers le pôle négatif.
01:16:24 Il est chargé
01:16:25 vers le pôle négatif.
01:16:26 Il est chargé
01:16:27 vers le pôle négatif.
01:16:28 Il est chargé
01:16:29 vers le pôle négatif.
01:16:30 Il est chargé
01:16:31 vers le pôle négatif.
01:16:32 Il est chargé
01:16:33 vers le pôle négatif.
01:16:34 Il est chargé
01:16:35 vers le pôle négatif.
01:16:36 Il est chargé
01:16:37 vers le pôle négatif.
01:16:38 Il est chargé
01:16:39 vers le pôle négatif.
01:16:40 Il est chargé
01:16:41 vers le pôle négatif.
01:16:42 Il est chargé
01:16:43 vers le pôle négatif.
01:16:44 Il est chargé
01:16:45 vers le pôle négatif.
01:16:46 Il est chargé
01:16:47 vers le pôle négatif.
01:16:48 Il est chargé
01:16:53 vers le pôle négatif.
01:16:54 Il est chargé
01:16:55 vers le pôle négatif.
01:16:56 Il est chargé
01:16:57 vers le pôle négatif.
01:16:58 Il est chargé
01:16:59 vers le pôle négatif.
01:17:00 Il est chargé
01:17:01 vers le pôle négatif.
01:17:02 Il est chargé
01:17:03 vers le pôle négatif.
01:17:04 Il est chargé
01:17:05 vers le pôle négatif.
01:17:06 Il est chargé
01:17:07 vers le pôle négatif.
01:17:08 Il est chargé
01:17:09 vers le pôle négatif.
01:17:10 Il est chargé
01:17:11 vers le pôle négatif.
01:17:12 Il est chargé
01:17:13 vers le pôle négatif.
01:17:14 Il est chargé
01:17:15 vers le pôle négatif.
01:17:16 Il est chargé
01:17:17 vers le pôle négatif.
01:17:18 Il est chargé
01:17:19 vers le pôle négatif.
01:17:20 Il est chargé
01:17:21 vers le pôle négatif.
01:17:22 Il est chargé
01:17:23 vers le pôle négatif.
01:17:24 Il est chargé
01:17:25 vers le pôle négatif.
01:17:26 Il est chargé
01:17:27 vers le pôle négatif.
01:17:28 Il est chargé
01:17:29 vers le pôle négatif.
01:17:30 Il est chargé
01:17:31 vers le pôle négatif.
01:17:32 Il est chargé
01:17:33 vers le pôle négatif.
01:17:34 Il est chargé
01:17:35 vers le pôle négatif.
01:17:36 Il est chargé
01:17:37 vers le pôle négatif.
01:17:38 Il est chargé
01:17:39 vers le pôle négatif.
01:17:40 Il est chargé
01:17:41 vers le pôle négatif.
01:17:42 Il est chargé
01:17:47 vers le pôle négatif.
01:17:48 Il est chargé
01:17:49 vers le pôle négatif.
01:17:50 Il est chargé
01:17:51 vers le pôle négatif.
01:17:52 Il est chargé
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01:18:11 Et à la prochaine !
01:18:13 à tout le monde.